2026年2月4日，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所王瑞國團隊聯(lián)合中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、河北獸藥飼料監(jiān)察所等單位在期刊《Toxins》上發(fā)表題為" Simultaneous Quantification of Fumonisins and Their Hydrolyzed Metabolites in Donkey Plasma, Urine, and Feces Using LC-MS/MS: A Novel Method for Toxicokinetic and Exposure Assessment Studies "的研究論文。

該研究從暴露組學(xué)視角出發(fā)，首次建立并全面驗證了一種可同時定量驢血漿、尿液和糞便中三種伏馬菌素及其水解代謝物的LC-MS/MS方法。

針對不同生物基質(zhì)的復(fù)雜性，研究團隊分別優(yōu)化了鹽析輔助液-液萃取與稀釋-蒸發(fā)-進樣等前處理策略，并引入吉艾姆金剛1000溶劑蒸發(fā)工作站實現(xiàn)高通量、快速的樣品濃縮處理。該方法為驢這一重要經(jīng)濟物種的真菌毒素內(nèi)暴露水平解析與毒代動力學(xué)研究提供了關(guān)鍵分析工具，填補了相關(guān)領(lǐng)域的方法空白。

金剛1000溶劑蒸發(fā)工作站

研究背景

伏馬菌素（FBs）是一類廣泛污染玉米及其加工副產(chǎn)品的真菌毒素，其中FB?、FB?、FB?毒性最強，可通過抑制鞘脂代謝引發(fā)動物多種疾病，馬科動物尤為敏感。在動物體內(nèi)，伏馬菌素可水解生成水解伏馬菌素（HFBs），與母體毒素共同存在于血漿、尿液和糞便中，是評估真菌毒素內(nèi)暴露水平的關(guān)鍵生物標(biāo)志物。

驢作為重要的經(jīng)濟物種，其日糧易受伏馬菌素污染，但關(guān)于驢體內(nèi)伏馬菌素的毒代動力學(xué)研究幾乎空白。從暴露組學(xué)視角出發(fā)，實現(xiàn)對多種生物基質(zhì)中母體化合物及其代謝物的同步精準(zhǔn)檢測，是開展暴露評估與毒代動力學(xué)研究的前提。然而，現(xiàn)有分析方法多針對單一基質(zhì)、代謝物覆蓋不全，且前處理復(fù)雜耗時，驢生物基質(zhì)中更無同時檢測FBs和HFBs的驗證方法。

因此，建立一種簡便、靈敏、適用于驢血漿、尿液和糞便的FBs及HFBs同步定量方法，具有重要的科學(xué)意義與應(yīng)用價值。

結(jié)果與討論

一、MS參數(shù)優(yōu)化

為最大化靈敏度與特異性，研究對質(zhì)譜參數(shù)進行了系統(tǒng)優(yōu)化。通過直接進樣比較ESI正負(fù)兩種電離模式，結(jié)果顯示：伏馬菌素（FBs）在兩種模式下均可電離，但ESI?模式信號強度較ESI?高出逾一個數(shù)量級；水解伏馬菌素（HFBs）僅在ESI?模式下可檢測。因此，本研究選擇ESI?模式進行后續(xù)分析。

根據(jù)SANTE指南要求，為每個分析物選擇兩個特征離子對用于多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。值得注意的是，FB?/FB?和HFB?/HFB?兩對位置異構(gòu)體具有相同的碎片離子，其準(zhǔn)確定量完全依賴于色譜分離。優(yōu)化后的MRM參數(shù)見表1。

二、色譜條件優(yōu)化

研究首先比較了BEH C??與HSS T3兩款色譜柱。結(jié)果表明，BEH C??柱分離效果更優(yōu)，成功實現(xiàn)了FB?/FB?和HFB?/HFB?兩對異構(gòu)體的基線分離。進一步比較有機改性劑后發(fā)現(xiàn)，水-乙腈體系較水-甲醇體系峰形更尖銳，因此選用BEH C??柱配合水-乙腈流動相。

流動相添加劑的選擇至關(guān)重要。不加添加劑或使用NH?OH、乙酸時，FBs無法檢出；HFBs在不加添加劑時峰形拖尾嚴(yán)重，在NH?OH條件下亦無法檢出。甲酸對FBs信號增強效果最佳，濃度從0.1%提高至0.5%時，FBs峰面積平均提升40%。因此，最終選用水-乙腈（含0.5%甲酸）作為流動相。

針對FBs的殘留效應(yīng)（高達(dá)5%），優(yōu)化了進樣針清洗程序：清洗溶劑中添加0.5%甲酸，清洗時間從10秒延長至40秒，殘留降至0.5%以下。

樣品前處理優(yōu)化

本研究針對驢血漿、尿液和糞便三種基質(zhì)，分別優(yōu)化了前處理流程，以簡便實用為原則，省略了復(fù)雜的SPE或IAC凈化步驟。

尿液基質(zhì)復(fù)雜，直接稀釋-進樣導(dǎo)致信號抑制，故采用鹽析輔助液-液萃取（SALLE）。FBs需充分酸化才能轉(zhuǎn)移至有機相，10%高氯酸（PCA）酸化效果最佳，提取液濃度為原樣濃度。提

糞便經(jīng)凍干、粉碎后加水制成勻漿，同樣采用SALLE提取。10% PCA酸化可保證提取效率，最終實現(xiàn)15倍稀釋，平衡基質(zhì)效應(yīng)與靈敏度。

血漿中FBs濃度極低，SALLE法回收率偏低，改用稀釋-蒸發(fā)-進樣（DES）法。取溶劑中添加1%乙酸即可滿足要求，實現(xiàn)4倍濃縮，提取液經(jīng)金剛1000溶劑蒸發(fā)工作站蒸干后復(fù)溶，無顯著磷脂干擾。

樣品前處理制備流程圖

方法驗證

本研究依據(jù)GB 5009.295-2023和SANTE/11312/2021指南，對方法進行了全面驗證，評估指標(biāo)包括選擇性、線性、靈敏度、基質(zhì)效應(yīng)、準(zhǔn)確度、精密度和殘留效應(yīng)。驗證結(jié)果表明，所有指標(biāo)均符合指南要求，方法可靠、靈敏度高。

結(jié)論

本研究成功建立并驗證了一種同時定量驢血漿、尿液和糞便中三種伏馬菌素及其水解代謝物的LC-MS/MS方法。針對不同基質(zhì)，分別采用鹽析輔助液-液萃取（SALLE）和稀釋-蒸發(fā)-進樣（DES）法進行前處理。方法驗證結(jié)果表明，該方法線性良好（R2 ≥ 0.99）、準(zhǔn)確可靠（回收率73.3%–111.5%，RSD < 20%），定量限滿足實際暴露水平檢測需求。

。該方法是首個在驢中實現(xiàn)多基質(zhì)、多代謝物同步定量的分析技術(shù)，其中金剛1000溶劑蒸發(fā)工作站的引入顯著提升了樣品處理效率，為毒代動力學(xué)研究和暴露評估提供了可靠工具

參考文獻：Simultaneous Quantification of Fumonisins and Their Hydrolyzed Metabolites in Donkey Matrices: A Tool for Exposure Assessment and Toxicokinetic Studies

Dongying Tian 1,?, Yunduo Zheng 2,?, Yandong Li 3, Qianwen Xing 3, Gang Lin 4, Ronghua Zhu 4, Quigang Ma 2 , Peilong Wang 1 and Ruiguo Wang 1,*

https://www.mdpi.com/2072-6651/18/2/80

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